本人做酵母的基因敲除，为何敲除后PCR验证出现两条带？一条野生型，一条敲除后的条带。
首先单倍体中是存在基因的多拷贝的。其次建议楼主检查一下实验，因为即使多拷贝也是都能敲掉的。
楼主如果能确定你的酵母都是单倍体且是阳性的，那么检测拷贝数经典的方法是southern blotting楼主应该明白，不懂的话可以追问。创新且简单一点的方法就是realtime PCR用DNA作模板，用一个确定的单拷贝基因作对照，原理是拷贝数越多，同样循环扩增出的产物应该成倍增长。
望采纳，谢谢！
鼠尾鉴定转基因小鼠ai14跑出来三条带是为什么？
如果在鉴定转基因小鼠ai14的PCR反应中跑出了三条带，可能有以下原因：1、误差或污染：可能在试剂、处理样本、反应器等方面产生了误差或者污染，导致PCR反应中形成了不同大小的杂交产物。这种情况下可以尝试重新制备PCR试剂、DNA模板，并优化PCR反应体系和条件。
2、异质性：由于转基因小鼠ai14具有多个插入位点，可能存在异质性。如果某个位点被扩增，将出现一个大小与野生型(WT)不同的带，而另一个位点则可能出现第二条大小不同的带。如果两个位点同时扩增，就会出现一个第三条带。这种情况下，需要设计更具特异性的引物、提高PCR反应的选择性、增加PCR扩增循环次数等方法来降低PCR反应中的异质性。、
3、基因重组：转基因小鼠ai14可能出现外源DNA与内源DNA发生重组的情况，导致在PCR反应中扩增出大于或小于期望大小的带。这种情况下可以对具体的样本进行测序验证，以确定是否存在基因重组的情况。
在鉴定转基因小鼠ai14的PCR反应中出现三条带，需要结合实验具体情况，仔细分析可能存在的原因，并进行相关调整和优化来提高PCR反应的特异性和选择性，确保结果的可靠性。
为何我用转基因小鼠ai14做PCR会出现3条带
如果在鉴定转基因小鼠ai14的PCR反应中跑出了三条带，可能有以下原因：1、误差或污染：可能在试剂、处理样本、反应器等方面产生了误差或者污染，导致PCR反应中形成了不同大小的杂交产物。这种情况下可以尝试重新制备PCR试剂、DNA模板，并优化PCR反应体系和条件。
2、异质性：由于转基因小鼠ai14具有多个插入位点，可能存在异质性。如果某个位点被扩增，将出现一个大小与野生型(WT)不同的带，而另一个位点则可能出现第二条大小不同的带。如果两个位点同时扩增，就会出现一个第三条带。这种情况下，需要设计更具特异性的引物、提高PCR反应的选择性、增加PCR扩增循环次数等方法来降低PCR反应中的异质性。、
3、基因重组：转基因小鼠ai14可能出现外源DNA与内源DNA发生重组的情况，导致在PCR反应中扩增出大于或小于期望大小的带。这种情况下可以对具体的样本进行测序验证，以确定是否存在基因重组的情况。
在鉴定转基因小鼠ai14的PCR反应中出现三条带，需要结合实验具体情况，仔细分析可能存在的原因，并进行相关调整和优化来提高PCR反应的特异性和选择性，确保结果的可靠性。